抗原肽处理相关运载体等位基因多态性与类风湿关节炎相关性研究
【摘要】 目的 探讨皖籍汉族人抗原肽处理相关运载体(TAP)等位基因多态性及与类风湿关节炎(RA)的相关性。方法 采用低渗溶血法提取人血白细胞中的DNA，运用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法(其中三个位点的引物采用了错配法)和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，对50例RA患者和50例健康对照血样进行TAP等位基因多态性分析，寻找RA易感和抗性相关基因型。结果 TAP2665-A和565-A在RA组显著低于对照组(P=0.000)。RA组TAP2以379-V、687-S、665-T及565-T为主，四种等位基因频率均显著高于对照组(P<0.05);RA组379-I I(8%)、637-GG(8%)显著低于对照组(P<0.05)。TAP2-665、565在RA组都以纯合子TT(62%、70%)为主，显著高于对照组(P=0.000);而对照组均以AA(80%、78%)为主，且显著高于RA组(P=0.000)。结论 皖籍汉族人TAP等位基因除具有与其他地方人群共同的多态性特点外，还具有有别于其他地区人种的自身特征。皖籍汉族人存在RA的易感和抗性TAP等位基因。
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关键词 抗原肽处理相关运载体 等位基因 类风湿关节炎 多聚酶链反应-限制性片段长度多态性
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)16-2401-04
The study on the association between the
polymorphism of human transporters associated with antigen
processing alleles and rheumatoid arthritis.
Shen Chong，Ye Dongqing Zhai Jingxia，et al.
Department of Epidemiological&Bio-statistic，School of Public Health，Nanjing Medical University，Nanjing210029.
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【Abstract】 Objective To investigate the relation between the polymorphism of transporter associated with antigen processing(TAP)genes and rheumatoid arthritis(RA)in Anhui Hansman.Methods Genomic DNA was exˉtracted by low permeating hemolysis from leucocyte.The human transporters associated with antigen processing(TAP)alleles polymorphism of50RA patients and50healthy individuals，was defined by polymerase chain reaction-reˉstriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)amplification and polyacrylamidedel electrophoresis.Three sites were amplificated by mismatch amplification mutation assay.Results TAP2alleles frequencies of665-A and565-A in RA group were significantly lower than in control group(P=0.000)and that of379-V，687-S，665-T，565-T were higher in RA than in controlgroup(P<0.05).As for TAP alleles phenotype frequencies，the hoˉmozygosity for379which is I I(8%)and637-GG(8%)，665-AA(24%)，565-AA(16%)are associated with reˉsistance to RA(P<0.05or P=0.000)，while TAP2-665-TT(62%)，565-TT(70%)seems to confer susceptiˉbility for RA(P=0.000).Conclusion TAP alleles polymorphism in Anhui Han people shows its own characteristics difference from some other race and there is some TAP alleles susceptible or resistant to RA in Anhui Han people.
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Key words transporter associated with antigen processing(TAP) alleles phenotype rheumatoid arthritis(RA) polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)
目前国内外有关RA分子生物学研究 [1～4] 多集中于HLA-A、DQ及DR区基因的对RA遗传易感性的作用上，而抗原加工呈递相关基因的研究相对较少，本研究着重研究中国汉族人HLA-TAP几个主要 [4] 等位基因多态性与RA的关系，以便发现与RA相关的易感基因和抗性基因，从而为RA病因学、诊断学及基础研究提供科学依据。 ˇ 基金项目:安徽省教委自然科学基金(编号:2000J1113)
1 材料与方法
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1.1 研究对象 本研究选择皖籍汉人(包括研究个体在内向上三代人均在皖居住的汉族人)作为研究对象。选择合肥某三甲医院已经确诊的50例类风湿关节炎病人(均符合美国风湿病协会1987年制定的RA诊断标准)作为病例组，以同地区体检健康者作为健康对照。两组男女均各为16(32%)、34(68%)例，两组间性别比较差异无显著性(P>0.1)。病例组平均年龄为(45.44±13.59)岁，对照组为(45.32±13.73)岁，两组间差异无显著性(P>0.1)。
1.2 研究方法 抗凝血中白细胞DNA的提取参照文献1。本实验根据限制性内切酶的选择，并参照文献7对TAP2379、565、665及687位点扩增引物进行了错配设计，TAP1333、637位点的引物参考文献9而设计。PCR反应体积为30μl(包括50ng/μl模板DNA2μl，Primer5′、3′各1.5μl，10buffer3μl，100ng/μl dNTP5μl，dH 2 O17μl，Taq酶1U)。反应条件为95℃，2min，1个循环;95℃、1min，52℃、1min，72℃、1min，30个循环;72℃，5min，1个循环。取PCR产物8μl进行限制性酶切。酶切反应体系为20μl，各位点的限制性内切酶及酶切反应条件分别为TAP1-333:Sau3AI37℃1～1.5h，65℃灭活10min;TAP1-637:AccI37℃1～1.5h，65℃灭活10min;TAP2-379:BstuI37℃1～1.5h，直接酶切;TAP2-665:MspI37℃1～1.5h，65℃灭活10min;TAP2-565:RsaI37℃1～1.5h，65℃灭活10min;TAP2-687:BfaI60℃1～1.5h，80℃灭活20min。取10μl酶切产物进行聚丙酰胺凝胶电泳分析。将电泳分析结果用EPiData2.0软件输入计算机，用SPSS10.0软件进行统计分析。
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2 结果
2.1 非变性聚丙酰胺凝胶电泳分离TAP等位基因结果 见图1。 图1 TAP1-1等位基因Sau 3AI限制性酶切片段分离图谱酶切片段分离结果显示，A、B、C、E均为Val/Ile杂合子(146bp+118bp+74bp)。D、F为Ile/Ile纯合子(118bp+74bp)。
将所扩增的2个TAP1基因的区域及4个TAP2基因的区域分别定义为TAP1-1、TAP1-2、TAP2-1、TAP2-2及TAP2-3。
TAP1-1区域是一个包含第4外显子的长235bp的TAP1基因片段，其编码产物第333氨基酸位点具有二态性(Ile-Val);Sau3AI酶切分离结果见图1。
TAP1-2区域是一个包括第10外显子的长183bp的TAP1基因片段，其编码产物第637氨基酸位点具有二态性(Asp-Gly);AccI酶切分离结果见图2。
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TAP2-1区域是一个包括第6个外显子的长212bp的TAP2基因片段，其编码产物第379氨基酸位点具有二态性(Val-Ile);BstuI酶切分离结果见图3。
TAP2-2区域包括一个含第11外显子的长227bp的TAP2基因片段，其编码产物具有第665氨基酸二态性位点(Thr-Ala)和一个687位点(Stop-Glu)二态性位点;MspI与RsaI酶切分离结果分别见图4和图5。 TAP2-3区域包括第9外显子的长155bp的TAP1基因片段，其编码产物的第565氨基酸位点具有二态性(Ala-Thr)，BfaI酶切分离结果见图6。
图2 TAP1-2等位基因AccI 限制性酶切片段分离图谱
酶切片段分离结果显示，A均为Asp/Asp纯合子(132bp+51bp);B为Asp/Gly杂合子(183bp+132bp+51bp);C为Gly/Gly纯合子(183bp)。
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图3 TAP2-1等位基因BstuI 限制性酶切片段分离图谱
酶切片段分离结果显示，A为Val/Ile杂合子(212bp+192bp);B为纯合子Ile/Ile(212bp);C为纯合子Val/Val(192bp)。
图4 TAP2-2等位基因MspI 限制性酶切片段分离图谱
酶切片段分离结果显示，A为纯合子Ala/Ala(227bp);B为杂合子Thr/Ala(227bp+207bp+20bp);C为纯合子Thr/Thr(207bp+20bp)。图5 TAP2-2等位基因RsaI 限制性酶切片段分离图谱
酶切产物分离结果显示，A为纯合子Stop/Stop(127bp+88bp+12bp);B为杂合子Stop/Glu(215bp+127bp+88bp+12bp);C为纯合子Glu/Glu(215bp+12bp)。图6 TAP2-3等位基因BfaI 限制性酶切片段分离图谱
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酶切产物分离结果显示，A为纯合子Thr/Thr(132bp+23bp);B为纯合子Ala/Ala(155bp);C为杂合子Thr/Ala(155bp+132bp+23bp)。
2.2 RA病例和正常对照TAP等位基因型频率分布 见表1。 RA病例组和对照组TAP1等位基因型均以333-I(88%、94%)和637-D(94%、98%)为主，病例和对照之间TAP1各等位基因频率比较均差异无显著性(P>0.5)。RA组TAP2以379-V、687-S、665-T及565-T为主，等位基因频率分别为92%、92%、78%、84%，四种等位基因频率均显著高于对照组(P<0.05)。而正常对照组以379-V、687-S、665-A及565-A为主，分别为74%、78%、92%、90%。TAP2665-A和565-A在RA组显著低于对照组(P=0.000)。
2.3 RA病例和对照TAP等位基因表型频率分布比较 见表2。RA病例和对照组TAP1均以纯合子333-Ⅱ、637-DD为主，分别占76%、80%及82%、86%，637-GG频率较低，仅为6%和2%;两组间各基因表型频率比较差异均无显著性(P>0.1)。RA组和病例组TAP2379、687分别以VV、SS为主;RA组379-Ⅱ(8%)、637-GG(8%)最低，并显著低于对照组(P<0.05)。TAP2-665、565在RA组都以纯合子TT(62%、70%)为主，均显著高于对照组(P=0.000);而对照组均以AA(80%、78%)为主，且显著高于RA组(P=0.000)。
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表1 RA病例和对照TAP等位基因型频率分布的比较 例(%)
表2 RA病例和对照TAP等位基因表型频率分布比较 例(%)
3 讨论
目前有关RA免疫与病理学研究认为，RA与进入机体抗原的降解呈递异常、补体系统和细胞因子功能和表达异常引起免疫系统调节功能的紊乱，从而导致炎性反应、免疫复合物沉积直接相关。TAP作为MHCⅠ类分子限制性抗原处理相关因子，在RA发病的异常免疫机制中发挥着重要的免疫学功能 [5] 。研究 [6] 发现，缺失TAP1转基因小鼠容易发生RA。研究RA可能存在的HLA-TAP易感或抗性基因，对阐明RA发病机制并进一步揭示其遗传学病因有着重要意义。
由于PCR-SSO和PCR-SSP方法依赖于较短的核苷酸片段杂交，因此当实验条件不能严格控制时结果便会产生假阳性或假阴性 [7] 。本实验研究采用的PCR-RFLP技术是国内外公认的较为准确、可靠的检测等位基因多态性技术，可以对TAP等位基因进行准确定型 [8] 。
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PCR-RFLP技术提供一个可变的方法，可作为替代一种扩增的难控制的突变体系、序列特异性寡核苷酸及单股构造多态性，并指明了序列特异性或等位基因多态性。
本研究结果发现，皖籍汉族人HLA-TAP等位基因具有与上海地区正常汉族人和维吾尔族人群TAP等位基因表型以333-Ⅱ、637-DD及379-VV为主，333-VV、637-GG及379-I I相对较低，等位基因单倍型以TAP1为主等共同特点外 [9，10] ，还具有皖籍汉族人自身的特征，同时还发现了新的等位基因单倍型。
研究结果发现，RA病例组和对照组TAP1等位基因型均以333-I(88%、94%)和637-A(94%、98%)为主，病例和对照之间TAP1各等位基因频率比较差异均无显著性(P>0.5)，这与对维吾尔族人群TAP基因进行研究 [10] 的结果相一致。RA组TAP2以379-V、687-S、665-T及565-T为主，等位基因频率分别为92%、92%、78%、84%，四种等位基因频率均显著高于对照组(P<0.05)，对维吾尔族人的有关研究也发现RA组565-T显著高于正常对照，但379-I却低于对照组。而正常对照组以379-V、687-S、665-A及565-A为主，分别为74%、78%、92%、90%。TAP2665-A和565-A在RA组显著低于对照组(P=0.000)。而维吾尔族人的有关研究结果发现RA组687-S显著高于正常对照。对日本人和泰国人的研究 [8～9] 未发现与上述有关TAP等位基因分布的类似特点。
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等位基因表型的分析结果表明，RA组和病例组TAP2379、687分别以VV、SS为主，RA组379-Ⅱ(8%)、637-GG(8%)最低，并显著低于对照组(P<0.05)，而日本人群、上海人群、维吾尔族人均无此差异 [8～10] 。TAP2-665、565在RA组都以纯合子TT(62%、70%)为主，均显著高于对照组 (P=0.000);而对照组均以AA(80%、78%)为主，且显著高于RA组(P=0.000)。Tuokko J等研究也发现TAP2665-TT在RA组显著高于对照组，687-SS同样如此，对上海、维吾尔族人群的研究 [9～11] 也有此特点，而本研究人群则无此差异。
本研究结果认为，皖籍汉族人TAP等位基因既与上海、新疆等地区不同人群乃至其他国家如日本、高加索地区的人群拥有相同的多态性特点，也有其自身的分布特点;从等位基因型、等位基因表型不同角度均可发现其与RA存在着一定的相关性，提示TAP等位基因多态性对RA的免疫与遗传变化具有重要意义，值得进一步研究。
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参考文献
1 Costello-P，Bresnihan-B，O’Farrelly-C，et al.Predominance of CD8+T lymphocytes in psoriatic arthritis.J-Rheumatol，1999，26(5):1117-1124.
2 Criswell LA，Amos CI.Update on genetic risk factors for systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis.Curr Opin Rheumatol，2000，12(2):85-90.
3 Tokunaga K，Ishikawa Y，Ogawa A，et al.Sequence-based association analysisof HLA classⅠandⅡalleles in Japanese supports conservaˉtion of common haplotypes.Immumogenetics，1997，46:199-205.
, 百拇医药
4 Keicho N，Tokunaga K，Nakata K，et al.Contribution of HLA genes to geneticprediposition in diffuse panbronchchiolitis.Am J Repir Cril Care Med，1998，158:846-850.
5 Tim Elliot.How does TAP associate withMHC classⅠmolecules?Imˉmunology today，1997，18(8):375-379.
6 Tuokko J，Pushnova E，Yli-Kerttula U，et al.TAP2alleles in inˉflamm atoryarthritis.Scand J Rheumatol，1998，27(3):225-229.
, 百拇医药
7 J Vinasco，Afraile，A Nieto et al.Analysis of LMP and TAP polymorˉphisms by polymerase chain reaction-restriction fragment length polyˉmorphism in rheumatoid arthritis.Ann Rheum Dis，1998，57:33-37.
8 Shoji Kuwata MD，Masami Yanagisawa BS，Hidehisa Saeki MD，et al.Lack of primary association between transporter associated with antigen processing genes and atopic dermatitis.J Allergy Clinicalimmunology，1995，96(6):1051-1060.
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9 Vejbaesya S，Luangtrakool P，Luangtrakool K，et al.Analysis of TAP and HLA-DM polymorphism in thai rheumatoid arthritis.Hum Imˉmunol，2000，61(3):309-313.
10 朱乃硕，黄啸宇，王福庆，等.中国汉族人抗原肽运载体(TAP)基因结构的多态性及其在类风湿关节炎易感性中的意义.中华微生物学和免疫学杂志，1998，16(5):309-312.
11 闵伟琪，施桂英.维吾尔族人群抗原处理相关转运体(TAP)基因多态性及与类风湿关节炎的相关性.中国免疫学杂志，1999，15(7):317-319.
(编辑曲 全)
作者单位:210029南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系
安徽医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系, http://www.100md.com(沈冲 叶冬青 翟金霞 黄芬 施晓明 陆伟 李向培)
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关键词 抗原肽处理相关运载体 等位基因 类风湿关节炎 多聚酶链反应-限制性片段长度多态性
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)16-2401-04
The study on the association between the
polymorphism of human transporters associated with antigen
processing alleles and rheumatoid arthritis.
Shen Chong，Ye Dongqing Zhai Jingxia，et al.
Department of Epidemiological&Bio-statistic，School of Public Health，Nanjing Medical University，Nanjing210029.
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【Abstract】 Objective To investigate the relation between the polymorphism of transporter associated with antigen processing(TAP)genes and rheumatoid arthritis(RA)in Anhui Hansman.Methods Genomic DNA was exˉtracted by low permeating hemolysis from leucocyte.The human transporters associated with antigen processing(TAP)alleles polymorphism of50RA patients and50healthy individuals，was defined by polymerase chain reaction-reˉstriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)amplification and polyacrylamidedel electrophoresis.Three sites were amplificated by mismatch amplification mutation assay.Results TAP2alleles frequencies of665-A and565-A in RA group were significantly lower than in control group(P=0.000)and that of379-V，687-S，665-T，565-T were higher in RA than in controlgroup(P<0.05).As for TAP alleles phenotype frequencies，the hoˉmozygosity for379which is I I(8%)and637-GG(8%)，665-AA(24%)，565-AA(16%)are associated with reˉsistance to RA(P<0.05or P=0.000)，while TAP2-665-TT(62%)，565-TT(70%)seems to confer susceptiˉbility for RA(P=0.000).Conclusion TAP alleles polymorphism in Anhui Han people shows its own characteristics difference from some other race and there is some TAP alleles susceptible or resistant to RA in Anhui Han people.
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Key words transporter associated with antigen processing(TAP) alleles phenotype rheumatoid arthritis(RA) polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)
目前国内外有关RA分子生物学研究 [1～4] 多集中于HLA-A、DQ及DR区基因的对RA遗传易感性的作用上，而抗原加工呈递相关基因的研究相对较少，本研究着重研究中国汉族人HLA-TAP几个主要 [4] 等位基因多态性与RA的关系，以便发现与RA相关的易感基因和抗性基因，从而为RA病因学、诊断学及基础研究提供科学依据。 ˇ 基金项目:安徽省教委自然科学基金(编号:2000J1113)
1 材料与方法
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1.1 研究对象 本研究选择皖籍汉人(包括研究个体在内向上三代人均在皖居住的汉族人)作为研究对象。选择合肥某三甲医院已经确诊的50例类风湿关节炎病人(均符合美国风湿病协会1987年制定的RA诊断标准)作为病例组，以同地区体检健康者作为健康对照。两组男女均各为16(32%)、34(68%)例，两组间性别比较差异无显著性(P>0.1)。病例组平均年龄为(45.44±13.59)岁，对照组为(45.32±13.73)岁，两组间差异无显著性(P>0.1)。
1.2 研究方法 抗凝血中白细胞DNA的提取参照文献1。本实验根据限制性内切酶的选择，并参照文献7对TAP2379、565、665及687位点扩增引物进行了错配设计，TAP1333、637位点的引物参考文献9而设计。PCR反应体积为30μl(包括50ng/μl模板DNA2μl，Primer5′、3′各1.5μl，10buffer3μl，100ng/μl dNTP5μl，dH 2 O17μl，Taq酶1U)。反应条件为95℃，2min，1个循环;95℃、1min，52℃、1min，72℃、1min，30个循环;72℃，5min，1个循环。取PCR产物8μl进行限制性酶切。酶切反应体系为20μl，各位点的限制性内切酶及酶切反应条件分别为TAP1-333:Sau3AI37℃1～1.5h，65℃灭活10min;TAP1-637:AccI37℃1～1.5h，65℃灭活10min;TAP2-379:BstuI37℃1～1.5h，直接酶切;TAP2-665:MspI37℃1～1.5h，65℃灭活10min;TAP2-565:RsaI37℃1～1.5h，65℃灭活10min;TAP2-687:BfaI60℃1～1.5h，80℃灭活20min。取10μl酶切产物进行聚丙酰胺凝胶电泳分析。将电泳分析结果用EPiData2.0软件输入计算机，用SPSS10.0软件进行统计分析。
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2 结果
2.1 非变性聚丙酰胺凝胶电泳分离TAP等位基因结果 见图1。 图1 TAP1-1等位基因Sau 3AI限制性酶切片段分离图谱酶切片段分离结果显示，A、B、C、E均为Val/Ile杂合子(146bp+118bp+74bp)。D、F为Ile/Ile纯合子(118bp+74bp)。
将所扩增的2个TAP1基因的区域及4个TAP2基因的区域分别定义为TAP1-1、TAP1-2、TAP2-1、TAP2-2及TAP2-3。
TAP1-1区域是一个包含第4外显子的长235bp的TAP1基因片段，其编码产物第333氨基酸位点具有二态性(Ile-Val);Sau3AI酶切分离结果见图1。
TAP1-2区域是一个包括第10外显子的长183bp的TAP1基因片段，其编码产物第637氨基酸位点具有二态性(Asp-Gly);AccI酶切分离结果见图2。
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TAP2-1区域是一个包括第6个外显子的长212bp的TAP2基因片段，其编码产物第379氨基酸位点具有二态性(Val-Ile);BstuI酶切分离结果见图3。
TAP2-2区域包括一个含第11外显子的长227bp的TAP2基因片段，其编码产物具有第665氨基酸二态性位点(Thr-Ala)和一个687位点(Stop-Glu)二态性位点;MspI与RsaI酶切分离结果分别见图4和图5。 TAP2-3区域包括第9外显子的长155bp的TAP1基因片段，其编码产物的第565氨基酸位点具有二态性(Ala-Thr)，BfaI酶切分离结果见图6。
图2 TAP1-2等位基因AccI 限制性酶切片段分离图谱
酶切片段分离结果显示，A均为Asp/Asp纯合子(132bp+51bp);B为Asp/Gly杂合子(183bp+132bp+51bp);C为Gly/Gly纯合子(183bp)。
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图3 TAP2-1等位基因BstuI 限制性酶切片段分离图谱
酶切片段分离结果显示，A为Val/Ile杂合子(212bp+192bp);B为纯合子Ile/Ile(212bp);C为纯合子Val/Val(192bp)。
图4 TAP2-2等位基因MspI 限制性酶切片段分离图谱
酶切片段分离结果显示，A为纯合子Ala/Ala(227bp);B为杂合子Thr/Ala(227bp+207bp+20bp);C为纯合子Thr/Thr(207bp+20bp)。图5 TAP2-2等位基因RsaI 限制性酶切片段分离图谱
酶切产物分离结果显示，A为纯合子Stop/Stop(127bp+88bp+12bp);B为杂合子Stop/Glu(215bp+127bp+88bp+12bp);C为纯合子Glu/Glu(215bp+12bp)。图6 TAP2-3等位基因BfaI 限制性酶切片段分离图谱
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酶切产物分离结果显示，A为纯合子Thr/Thr(132bp+23bp);B为纯合子Ala/Ala(155bp);C为杂合子Thr/Ala(155bp+132bp+23bp)。
2.2 RA病例和正常对照TAP等位基因型频率分布 见表1。 RA病例组和对照组TAP1等位基因型均以333-I(88%、94%)和637-D(94%、98%)为主，病例和对照之间TAP1各等位基因频率比较均差异无显著性(P>0.5)。RA组TAP2以379-V、687-S、665-T及565-T为主，等位基因频率分别为92%、92%、78%、84%，四种等位基因频率均显著高于对照组(P<0.05)。而正常对照组以379-V、687-S、665-A及565-A为主，分别为74%、78%、92%、90%。TAP2665-A和565-A在RA组显著低于对照组(P=0.000)。
2.3 RA病例和对照TAP等位基因表型频率分布比较 见表2。RA病例和对照组TAP1均以纯合子333-Ⅱ、637-DD为主，分别占76%、80%及82%、86%，637-GG频率较低，仅为6%和2%;两组间各基因表型频率比较差异均无显著性(P>0.1)。RA组和病例组TAP2379、687分别以VV、SS为主;RA组379-Ⅱ(8%)、637-GG(8%)最低，并显著低于对照组(P<0.05)。TAP2-665、565在RA组都以纯合子TT(62%、70%)为主，均显著高于对照组(P=0.000);而对照组均以AA(80%、78%)为主，且显著高于RA组(P=0.000)。
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表1 RA病例和对照TAP等位基因型频率分布的比较 例(%)
表2 RA病例和对照TAP等位基因表型频率分布比较 例(%)
3 讨论
目前有关RA免疫与病理学研究认为，RA与进入机体抗原的降解呈递异常、补体系统和细胞因子功能和表达异常引起免疫系统调节功能的紊乱，从而导致炎性反应、免疫复合物沉积直接相关。TAP作为MHCⅠ类分子限制性抗原处理相关因子，在RA发病的异常免疫机制中发挥着重要的免疫学功能 [5] 。研究 [6] 发现，缺失TAP1转基因小鼠容易发生RA。研究RA可能存在的HLA-TAP易感或抗性基因，对阐明RA发病机制并进一步揭示其遗传学病因有着重要意义。
由于PCR-SSO和PCR-SSP方法依赖于较短的核苷酸片段杂交，因此当实验条件不能严格控制时结果便会产生假阳性或假阴性 [7] 。本实验研究采用的PCR-RFLP技术是国内外公认的较为准确、可靠的检测等位基因多态性技术，可以对TAP等位基因进行准确定型 [8] 。
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PCR-RFLP技术提供一个可变的方法，可作为替代一种扩增的难控制的突变体系、序列特异性寡核苷酸及单股构造多态性，并指明了序列特异性或等位基因多态性。
本研究结果发现，皖籍汉族人HLA-TAP等位基因具有与上海地区正常汉族人和维吾尔族人群TAP等位基因表型以333-Ⅱ、637-DD及379-VV为主，333-VV、637-GG及379-I I相对较低，等位基因单倍型以TAP1为主等共同特点外 [9，10] ，还具有皖籍汉族人自身的特征，同时还发现了新的等位基因单倍型。
研究结果发现，RA病例组和对照组TAP1等位基因型均以333-I(88%、94%)和637-A(94%、98%)为主，病例和对照之间TAP1各等位基因频率比较差异均无显著性(P>0.5)，这与对维吾尔族人群TAP基因进行研究 [10] 的结果相一致。RA组TAP2以379-V、687-S、665-T及565-T为主，等位基因频率分别为92%、92%、78%、84%，四种等位基因频率均显著高于对照组(P<0.05)，对维吾尔族人的有关研究也发现RA组565-T显著高于正常对照，但379-I却低于对照组。而正常对照组以379-V、687-S、665-A及565-A为主，分别为74%、78%、92%、90%。TAP2665-A和565-A在RA组显著低于对照组(P=0.000)。而维吾尔族人的有关研究结果发现RA组687-S显著高于正常对照。对日本人和泰国人的研究 [8～9] 未发现与上述有关TAP等位基因分布的类似特点。
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等位基因表型的分析结果表明，RA组和病例组TAP2379、687分别以VV、SS为主，RA组379-Ⅱ(8%)、637-GG(8%)最低，并显著低于对照组(P<0.05)，而日本人群、上海人群、维吾尔族人均无此差异 [8～10] 。TAP2-665、565在RA组都以纯合子TT(62%、70%)为主，均显著高于对照组 (P=0.000);而对照组均以AA(80%、78%)为主，且显著高于RA组(P=0.000)。Tuokko J等研究也发现TAP2665-TT在RA组显著高于对照组，687-SS同样如此，对上海、维吾尔族人群的研究 [9～11] 也有此特点，而本研究人群则无此差异。
本研究结果认为，皖籍汉族人TAP等位基因既与上海、新疆等地区不同人群乃至其他国家如日本、高加索地区的人群拥有相同的多态性特点，也有其自身的分布特点;从等位基因型、等位基因表型不同角度均可发现其与RA存在着一定的相关性，提示TAP等位基因多态性对RA的免疫与遗传变化具有重要意义，值得进一步研究。
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参考文献
1 Costello-P，Bresnihan-B，O’Farrelly-C，et al.Predominance of CD8+T lymphocytes in psoriatic arthritis.J-Rheumatol，1999，26(5):1117-1124.
2 Criswell LA，Amos CI.Update on genetic risk factors for systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis.Curr Opin Rheumatol，2000，12(2):85-90.
3 Tokunaga K，Ishikawa Y，Ogawa A，et al.Sequence-based association analysisof HLA classⅠandⅡalleles in Japanese supports conservaˉtion of common haplotypes.Immumogenetics，1997，46:199-205.
, 百拇医药
4 Keicho N，Tokunaga K，Nakata K，et al.Contribution of HLA genes to geneticprediposition in diffuse panbronchchiolitis.Am J Repir Cril Care Med，1998，158:846-850.
5 Tim Elliot.How does TAP associate withMHC classⅠmolecules?Imˉmunology today，1997，18(8):375-379.
6 Tuokko J，Pushnova E，Yli-Kerttula U，et al.TAP2alleles in inˉflamm atoryarthritis.Scand J Rheumatol，1998，27(3):225-229.
, 百拇医药
7 J Vinasco，Afraile，A Nieto et al.Analysis of LMP and TAP polymorˉphisms by polymerase chain reaction-restriction fragment length polyˉmorphism in rheumatoid arthritis.Ann Rheum Dis，1998，57:33-37.
8 Shoji Kuwata MD，Masami Yanagisawa BS，Hidehisa Saeki MD，et al.Lack of primary association between transporter associated with antigen processing genes and atopic dermatitis.J Allergy Clinicalimmunology，1995，96(6):1051-1060.
, 百拇医药
9 Vejbaesya S，Luangtrakool P，Luangtrakool K，et al.Analysis of TAP and HLA-DM polymorphism in thai rheumatoid arthritis.Hum Imˉmunol，2000，61(3):309-313.
10 朱乃硕，黄啸宇，王福庆，等.中国汉族人抗原肽运载体(TAP)基因结构的多态性及其在类风湿关节炎易感性中的意义.中华微生物学和免疫学杂志，1998，16(5):309-312.
11 闵伟琪，施桂英.维吾尔族人群抗原处理相关转运体(TAP)基因多态性及与类风湿关节炎的相关性.中国免疫学杂志，1999，15(7):317-319.
(编辑曲 全)
作者单位:210029南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系
安徽医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系, http://www.100md.com(沈冲 叶冬青 翟金霞 黄芬 施晓明 陆伟 李向培)