采用RT-PCR法检测HepG2细胞骨架相关蛋白的mRNA表达水平。取对数生长期的HepG2细胞，按1×106个/孔接种于6孔板中，分为阴性对照组和柠檬酚低、高浓度组(终浓度为50、100 μmol/L)，每组设置2个复孔。将细胞培养至细胞融合率达80%后，弃上清液，柠檬酚低、高浓度组加入相应浓度的含药培养基，阴性对照组加入等体积培养基。将细胞置于细胞培养箱中培养24 h后，收集细胞，并提取总RNA。按逆转录试剂盒说明书操作，先将RNA逆转录为cDNA，再按荧光定量PCR试剂盒说明书操作进行PCR扩增。扩增程序： 95 ℃预变性2 min;95 ℃变性5 s，60 ℃退火30 s，60 ℃延伸30 s，40个循环。采用荧光分析软件对产物进行分析，并以GAPDH为内参，采用2-ΔΔCt法计算F-actin、β-tubulin、Ezrin mRNA的相对表达水平。引物信息见表1。

    2.5 柠檬酚对细胞骨架相关蛋白表达水平的影响

    采用Western blotting法检测HepG2细胞骨架相关蛋白的表达水平 ......