褪黑素对大鼠急性脊髓损伤内质网应激蛋白GADD153/CHOP表达的影响(2)
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1.4 心脏灌注和组织观察
1.4.1 心脏灌注 (1)1%的戊巴比妥钠(0.1 mL/kg)腹腔注射麻醉，仰卧位固定于解剖板，自腹腔中线开始解剖，向上打开胸腔，适当断除肋骨，暴露心脏；(2)以止血钳牵拉，撑开心脏入口，固定两侧肌肉，进行心脏穿刺；(3)用中号静脉滴注针头(磨除针尖)自左心尖斜行穿至右侧主动脉，动脉夹固定针头，剪破右心耳；(4)先以50 mL注射器推注0.9%氯化钠溶液4～5针(200～250 mL)，控制适当流速，勿鼓破血管，至肝脏颜色无色、右心耳流出的液体澄清，体循环内血液彻底流出；(5)拔掉注射器，连接4%多聚甲醛滴注瓶，排除气泡，进行多聚甲醛灌注固定40～90 min，大鼠身体可完全僵硬。
1.4.2 组织提取 以T9～T11胸椎为中心，取损伤阶段脊柱约2 cm，以巩膜咬切器仔细咬去椎板、椎体和周围附着的瘢痕组织，将完整的脊髓组织剥离出来，置于4%多聚甲醛固定保存。
1.4.3 组织形态学观察 组织浸泡24 h以上，常规石蜡包埋，作损伤中心部位连续切片4张，HE染色，显微镜观察形态学病理特征。
1.5 免疫组织化学染色
常规石蜡包埋，作损伤中心部位连续切片4张，5 μm厚度切片，随即抽取2张切片进行免疫组织化学染色。采用HPIAS-1000图像分析系统分析图像；高倍镜下，每张切片随机选取5个视野，测定累计光密度(integrated optical density， IOD)；取平均值。
1.6 缺口原位末端标记法(TUNEL)染色
常规石蜡包埋，作损伤中心部位连续切片4张，5 μm厚度切片，随机抽取切片1张，进行TUNEL染色。主要过程包括：(1)脱蜡入水后，室温下0.3%H2O2处理10 min，0.01 mol/L PBS漂洗 ......
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