1.3 实验方法

    1.3.1 PCR引物探针 根据相关文献报道的关于人细小病毒B19 DNA 的TaqMan探针及对应的引物 [8]。用Primer Premie 5.0软件对此探针和引物序列进行评价。见表1。

    1.3.2 细小病毒DNA的提取 血浆样品用1.5mlEP管标记后每份提取200μL，加入200μL缓冲液(现配)使用上海科华生物工程股份有限公司核酸提取试剂盒，在经过78℃恒温处理及分别经过8000、12000rpm/min离心处理后，最终获得每份DNA为50μL，样品在-30℃保存备用。血液制品各类样品进行浓缩后，同血浆样品提取方法最终获得50μL/份，-30℃保存备用。

    1.3.3 实时定量PCR反应体系和反应条件 经多次实验及参考厂家人细小病毒B19病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)说明书，最终确定反应体系为PCR扩增体系50μL：Premix Ex Taq TM(2x)25μL，引物各1μL(10mmol/L)，探针1μL(10mmol/L)DNA模板2μL ......